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1981年，王一楠出生在云南昆明。父亲是北京人，母亲是上海人，由于父母都是上海知青，王一楠从小在昆明长大。1995年，王一楠和姐姐同时参加高考，当时她考上中央戏剧学院和上海戏剧学院两所大学，姐姐则被上海财经大学录取，父母便选择让她也留在上海读书。1995年，进入上戏表演系95班学习，与陆毅、鲍蕾、罗海琼、田海蓉、薛佳凝、朱泳腾成为同班同学，王一楠是班里的团支书。王一楠在校期间的学监舒蓉（高鑫母亲）后来成为她的婆婆。1999年，进入上海电影制片厂，但制片厂的工作模式与王一楠的梦想有出入，她更钟情于话剧舞台，转而加入上海话剧艺术中心。自此开始真正意义上的舞台艺术之旅。